Pour le bien-être et le bon fonctionnement des activités opérationnelles (logistique, HSE, suivie techniques/équipements et consommables)

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Mes travaux ont essentiellement pour but l'étude des interactions Protéine-Protéine et Protéine-ADN pour comprendre les mécanismes biologiques et découvrir de nouvelles cibles thérapeutiques pour le développement de nouveaux traitements anti-cancéreux. J'ai acquis des compétences approfondies et maîtrisées dans les méthodologies, techniques et outils (échelle plateforme et laboratoire) permettant d'aller du gène d'intérêt à la protéine soluble, pure, fonctionnelle et stable.Je réalise les constructions des plasmides d'expression avec les gènes d'intérêt (marqueur fluorescent, eGFP..., tag, His, MBP... , 1 ou plusieurs tags, site de clivage,...) par clonage (Gateway, enzymes de restrictions puis ligation) pour finir dans un système de sur-expression bactérien (par transformation, électroporation,...) optimisé en fonction des protéines recombinantes (Rosetta DE3pLysS, BL21, C41).Je met en place les protocoles de culture optimisé pour la surproduction (matrice multifactorielle pour le criblage des variables, T°C, Densité optique d'induction,..., souches, tag,...). Je met également en place les protocoles de purification adapté à chaque protéine (chromatographie d'affinité, échangeuse d'ions,..., gel filtration) ainsi que la caractérisation (stabilité, structures secondaires, état,...) par des tests d'activités, nanodrop, DLS, CD, pull down,... Je suis, en parallèle de ces activités, responsable de la mise en place de système de purification type AKTA (produit GE Healthcare) (prime, purifier et explorer) dont j'assure l'entretien, la maintenance, la plannification des prestations et la formation au personnels. Je gère les stocks, les commandes, les relations avec les fournisseurs, le séquençage, certains gros matériels (centrifugeuses,...), la formation des collaborateurs et personnels externes (étrangers et Nationaux) et les AKTAs du CRCM.De plus, je participe également à la mise en place de test par microscopie à fluorescence (molécule unique, microfluidique).

Constructions de gène avec tag spécifique pour la purification, clonage par différentes techniques de Biologie moléculaire dans un système de sur-expression bactérien adapté et optimisé pour la surproduction. Mise en place de protocole de culture (criblage de différentes variables). Mise en place des protocoles de purification adapté à chaque protéine et réalisation de la caractérisation de celles-ci (DLS, CD, préparation pour la RMN, pull down) pour l'étude des interactions Protéine-peptides ou Protéine-Protéine afin développer des inhibiteurs à but thérapeutique.

Formation aux différentes méthodologies, techniques et outils pour le criblage d'expression de protéines solubles, de leurs purifications et de leurs caractérisations.