Biologia molecolare in diagnosi genetica pre-impianto.

Attività lavorativa: Diagnosi Genetica Preimpianto (PGD) e Screening Genetico Preimpianto (PGS) su cellule del trofectoderma; Analisi di genotyping per lo studio dei fattori coinvolti in eventi trombotici: fattore V di Leiden, fattore II della coagulazione (protrombina) ed il gene MTHFR (Metilentetraidrofolatoreduttasi). Analisi di genotyping per lo studio del DNA-Dieta Naturale Ad hoc. CGH-array in diagnosi prenatale da villi coriali e da amniociti.Conoscenze acquisiteTecniche di biologia molecolareEstrazione di DNA da campioni di sangue, da tamponi buccali e da singola cellula, PCR, RT-PCR, analisi di microsatelliti, sequenziamento, estrazione dell’RNA, analisi di espressione genica e di genotyping mediante Real-Time PCR, CGH-array a BAC.

Ente: Istituto Veneto di Medicina Molecolare (VIMM)Presso: Laboratorio di istologia, microbiologia e biotecnologie mediche e Centro di crioconservazione dei gameti maschili – prof. C. ForestaData assunzione: 1 novembre 2006Sede di lavoro: PadovaRuolo: BiotecnologaTipo di contratto: contratto da libero professionista con l’Azienda ospedaliera di Padova (4° rinnovo di durata annuale).Attività lavorativa: ricerca e diagnostica sull’infertilità maschile e patologie ad essa associate: meccanismi di signaling ed analisi genetiche. Utilizzo di saggi di biologia molecolare per rilevare la presenza del Papillomavirus nel liquido seminale. Ricerca della trasmissione verticale del Papillomavirus mediante clonaggio di alcuni geni virali, successiva trasfezione cellulare e monitoraggio dell’espressione genica mediante Green Fluorescence Protein (microscopia a fluorescenza). Diagnosi genetica pre-concepimento mediante l’analisi del primo globulo polare.Conoscenze acquisiteTecniche di biologia molecolareEstrazione di DNA da campioni di sangue, da tessuti paraffinati e da singola cellula, mini e maxi-preparazioni, PCR, RT-PCR, DHPLC, analisi di microsatelliti, estrazione dell’RNA, analisi di espressione genica mediante Real-Time PCR, clonaggio e colture batteriche).Tecniche di biologia cellulareMantenimento in coltura di linee cellulari di mammifero.Tecniche di biochimicaEstrazione di proteine da lisati cellulari; analisi di proteine mediante Western Blot, saggi ELISA.

Studio di due proteine transmembrana coinvolte nella regolazione della crescita tumorale (Trop-1 e Trop-2) in ceppi di lievito, in cellule di mammifero ed in cellule di insetto al fine di produrre un anticorpo monoclonale che le riconosca (possibile applicazione terapeutica anti-tumorale dell’anticorpo) e di riuscire a determinare la struttura tridimensionale (cristallizzazione) dei domini extracellulari di queste due proteine.Tecniche di biologia molecolareMini e maxi-preparazioni, PCR, RT-PCR, clonaggiTecniche di biochimicaEstrazione di proteine da lisati di lieviti; analisi di proteine mediante Western Blot; precipitazione di proteine sia in condizioni native sia in condizioni denaturanti; dialisi; purificazione proteica sia in condizioni native che denaturanti, utilizzando tag di 6 His, su resina di Ni-NTA e su resina BD-Talon; purificazione proteica mediante cromatografia a scambio ionico; purificazione per affinità utilizzando anticorpi monoclonali coniugati su resine di matrice Sepharose con gruppi attivi di N-idrossisuccinimide; quantificazione di proteine; purificazione di anticorpi monoclonali e policlonali da siero e da ascite mediante matrici coniugate con proteina A o G.Tecniche di biologia cellulareMantenimento in coltura di linee cellulari di mammifero ed induzione di produzione di proteine specifiche rilasciate nel medium di coltura; saggi in vitro di stimolazione o inibizione della proliferazione cellulare; colture di ceppi di lievito; trasformazione di ceppi di lievito; induzione della produzione di proteine specifiche rilasciate nel terreno di coltura; selezione dei ceppi trasformati; mantenimento in coltura di cellule di insetto (Sf9: colture in monolayer e in sospensione); transfezione con vettori contenenti il gene codificante per la proteina di interesse (ricombinazione omologa tra vettore e genoma delle cellule) ed induzione della produzione di proteine specifiche rilasciate nel medium di coltura; colture e trasformazioni batteriche.