김현덕 Email and Phone Number

전) 로피바이오: 연구개발팀 / 전임연구원 / 바이오시밀러 개발, 세포주 개발분자생물학 바탕으로 고효율성 세포주 개발을 위한 발현벡터 개발1. 타켓 유전자의 과발현 및 장기발현을 유전자클로닝 통해 연구개발 진행 - 방어막 유전자 조사 (DNA 메틸화을 막아 계속적으로 발현을 유도시키는 유전자, 예) insulator, enhancer) - 프로모터 변이 – 유전자 기능을 잃어버리는 변이, 유전자 과발현이 되는 변이, 유전자 저발현이 되는 변이)고효율성 재조합 세포주 개발 및 선별1. 세포 선별 - 전기천공법을 이용한 재조합 형질전환 - 항생제를 이용하여 mini-pool 시스템으로 세포 선별 - FACS sorter을 이용하여 하나의 세포만을 선별2. 세포 선별 이후 세포배양 - Basal media screening, Feed media screening3. 세포배양 및 바이오리액터 - 125mL에서 2L까지 shake flask 37℃ CO2 인큐베이터에서 배양 - 세포 선별 이후 타켓 단백질의 장기발현안정성 분석 - 2L, 10L sartorius Biostat® B 제품 및 바이오리액터에 필요한 sartorius 제품을 이용하여 바이오리액터 세팅 후 세포배양 - 바이오리액터 세팅에 따른 단백질 생산량 최소 1g에서 최대 4g까지 생산 - 재조합 세포주에서 시중에 판매되고 있는 여러가지 배지 조건 시험 진행4. 세포배양 이후 대사 산물 분석 - Glucose, glutamine, glutamate, lactate, ammonia, protein IgGbiosimilar 4종류의 세포주를 개발, 선별 및 세포배양까지 진행함.유전자 클로닝부터 고효율성 세포주 개발, 작은용량의 세포배양부터 바이오리액터까지 cell line development upstream 전반적인 과정을 연구 개발하였음.중소기업청 주관으로 세포주 개발 과제로 진행.전) 시선바이오 머터리얼스 / 시선테라퓨틱스: 연구소 / 대리 / 신약개발, 신약전달물질 개발1. DNA 클로닝- 유전자 돌연변이 조작 – overlapping PCR 기법으로 진행.- 유전자 TA 클로닝- 형질전환 : heat shock2. In vivo - 생쥐 조작 (ICR, BALB/c, B57BL6, 누드 생쥐) - 관류 시험 (조직에서 피를 빼는 시험) - 생쥐 조직 분리 시험 (뇌, 간, 신장, 이자) : 분리 방법 (cyrosection, vibratome section) - 조직 염색 : 신약 전달 분석3. 약물전달 분석 - 미정맥 주사 이후, Biodistribution 분석 CY3, CY5을 이용) 4. In vitro - 세포 생존율 시험 : MTT assay을 통해 약물의 효과를 확인 - 세포 증식 시험 : 세포 상처회복 시험을 통해 세포증식 확인 - 세포 염색 : Immunocytochemistry (컴포칼 현미경 사용) - 단백질 발현량 확인 : western blot (semi-dry, wet-dry 방식)